[궁금하우] 세포 배양의 난제-마이코플라즈마 오염 방지와 제거하기

 

출처:pixabay

 

 

안녕하세요?

 

NV2NGN입니다.

 

 

요즘 마이코플라즈마 폐렴으로 언론에서 시끌시끌합니다.

 

그러나, 연구실에서 세포를 배양할 때도 마이코플라즈마 오염은 까탈스럽기 그지 없습니다.

 

이번 글에서는 세포 배양에서의 마이코플라즈마에 대해 알아보겠습니다.

 

 

인간을 숙주로 하는 마이코플라즈마

아래 종은 인간을 주요 숙주로 사용한다고 합니다.

M. amphoriforme

M. buccale

M. faucium

M. fermentans

M. genitalium

M. hominis

M. incognitus

M. lipophilum

M. orale

M. penetrans

M. pirum

M. pneumoniae

M. primatum

M. salivarium

M. spermatophilum

 

예를 들면, 마이코플라스마 종은 세균성 질염이 있는 여성에게서 분리되었습니다.[3] 마이코플라스마 제니탈리움 M. genitalium 은 골반 염증성 질환이 있는 여성에게서 발견됩니다.  자궁경부염, 불임, 조산 및 자연 유산의 위험 증가와 관련이 있습니다. 이 종은 일부 항생제에 대한 내성을 갖기도 한다고 합니다.

 

최근 언론에서 언급되었듯이, 마이코플라스마는 조산아의 영아 호흡 곤란 증후군, 기관지 폐 이형성증 및 뇌실 내 출혈과 관련이 있는 것으로 알려져 있습니다.

 

 

마이코플라즈마 및 마이코플라스마 검출 방법

 

마이코플라즈마는 세포 배양에서 가장 흔한 오염 물질 중 하나로, 세포벽이 없는 가장 작은 자유 생활 박테리아입니다.

마이코플라즈마는 항생제에 내성이 있으며 세포 배양에 일반적으로 사용되는 여과 방법을 통과할 수 있습니다.

오염될 경우, 세포 대사를 변화시키고, 세포 성장을 늦추며, 염색체 이상을 유발할 수 있습니다.

몇 가지 알려진 마이코플라즈마를 검출하는 방법은 다음과 같습니다.

 PCR 검출 방법: PCR은 마이코플라스마의 특정 DNA 서열을 증폭하여 검출하는 방법입니다.

qPCR 검출법: qPCR은 PCR의 변형으로, 실시간으로 DNA 증폭을 모니터링하여 보다 정확한 결과를 제공합니다.

형광 염색법: 이 방법은 마이코플라스마의 DNA에 결합하는 특정 형광 염료를 사용하여 마이코플라스마를 직접 시각화하는 방법입니다.

루시퍼라제 검출법: 이 방법은 마이코플라스마2의 특정 DNA 서열에 결합하는 루시퍼라제 효소를 사용하여 마이코플라스마를 검출하는 방법입니다.

LAMP(등온 PCR) 검출 방법: 이 방법은 특정 온도에서 DNA를 증폭하는 방법으로 앞서 설명한 PCR보다 더 빠르고 간단하게 마이코플라스마를 검출할 수 있습니다.

 

 

다음으로, 마이코플라즈마 오염을 방지하며 세포 배양하는 방법에 대해 생각해 봅니다.

 

마이코플라스마 오염 없이 세포를 배양하는 방법

 

마이코플라스마 오염을 피하기 위한 몇 가지 주요 단계는 다음과 같습니다:

 

 

세포 배양용 후드를 청결하게 유지합니다: 후드 내부가 깨끗해야 공기 흐름이 원활하기 때문입니다.

배양용 후드에 넣기 전에 70% 에탄올을 뿌려주세요: 오염 가능성을 줄입니다.

배양 접시와 배지 용기 뚜껑을 덮어두세요: 뚜껑을 열지 않는 한 세포 배양은 오염되지 않습니다.

뚜껑이 없는 용기를 손이나 팔로 흔들지 마세요: 미생물이 용기 안으로 날아가 오염을 일으킬 수 있습니다.

액체가 새면 즉시 닦아내세요: 액체를 흘리면 오염의 원인이 될 수 있으므로 누출된 액체는 즉시 청소해야 합니다.

이러한 방법을 따르면 세포 배양에서 마이코플라스마 오염을 피할 수 있습니다. 

 

그러나 완전한 예방은 불가능하므로 정기적인 마이코플라스마 검사가 필요합니다.

 

개인적으로 "예방이 최선책이다"라고 생각합니다.

일단 오염이 되면, 제거하는 일도 쉽지 않습니다.

시간, 노력, 비용이 만만치 않기 때문입니다.

차라리 세포를 버리고, 새로운 세포를 배양하는 것이 때로 나을 수 있습니다.

 

그런데, 때로 귀한 세포인 경우가 있습니다.

그럴 땐 제거해야 할 텐데요.

 

 

몇 가지 알려진 방법은 다음과 같습니다.

 

마이코플라즈마 제거 방법

 

항생제 처리: 테트라사이클린, 마크로라이드, 퀴놀론 등의 항생제는 상대적으로 낮은 농도에서 마이코플라즈마를 죽일 수 있습니다. 이들 항생제는 리보솜 번역을 방해하여 단백질 합성을 차단하거나 마이코플라즈마 DNA의 복제를 억제합니다.

 

플라스모신(Plasmocin): 플라스모신은 대부분의 마이코플라즈마를 배양 매체에서 제거할 수 있는 널리 사용되는 약물입니다.

또한 BM Cyclin, 플루오로퀴놀론(fluoroquinolone), ciprofloxacin, ciprobay, zagam, baytril, 테트라사이클린(tetracycline) 등의 약물도 마이코플라즈마 제거에 사용됩니다.

 

물리적 제거: 자동멸균기 등을 사용하여 마이코플라즈마를 제거할 수 있습니다. 이 방법은 마이코플라즈마가 오염되었을지 모르는 배양 관련 기구에서 마이코플라즈마를 물리적으로 제거하는 방법입니다. 

이러한 방법들은 마이코플라즈마 오염을 제거하는 데 효과적이지만, 완전히 제거하는 것은 어렵습니다.

 

또한, 여러 항생제를 사용하게 될 경우, 이 세포를 사용하여 후속 실험을 진행할 경우 그 실험 결과에 영향을 줄 수도 있음을 유념해야 합니다.

 

 

 

따라서, 정기적인 마이코플라즈마 검사가 필수적이라고 할 것입니다.

 

 

 

관련 제품 참고해 보시기 바랍니다.

(특정 회사를 홍보하는 것이 아님을 밝힙니다. 그 외 여러 회사에서 제품을 판매하고 있으니 검색해 보시면 좋겠습니다)

 

 

마이코플라즈마 제거 스프레이 | Myco-Out Mycoplasma Removal Spray | 고마바이오텍

 

마이코플라즈마 제거 | Mycoplasma Removal Agent (MRA) | 고마바이오텍

 

오늘은 마이코플라즈마와 세포배양에 대해 살펴보았습니다.

 

 

감사합니다.

 

지금까지 NV2NGN이었습니다.

 

 

 

 

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