[궁금사전][궁금하우] 5xFAD(034840-JAX) 마우스에서 PCR하기

 

출처: pixabay

 

 

 

안녕하세요?

NV2NGN입니다.

 

오늘은 5xFAD 마우스 모델에 대해 알아보고자 합니다.

 

5xFAD 마우스 모델(034840-JAX)은 가족성 알츠하이머병(AD) 연구에 널리 사용되는 모델입니다.

다음과 같은 몇 가지 주요 특징을 보입니다.

1. 도입유전자(transgene): 5xFAD 마우스는 총 5개의 AD 관련 돌연변이(APP와 PSEN1 유전자를 발현합니다: 스웨덴(K670N/M671L), 플로리다(I716V) 및 런던(V717I) 돌연변이)가 있는 인간 APP 및 PSEN1의 M146L 및 L286V 돌연변이.

2. 아밀로이드 병리학: 이 마우스는 초기 베타-아밀로이드(Aβ) 침착을 포함하여 알츠하이머병 아밀로이드 병리학의 주요 특징을 나타냅니다. 이는 신경내 Aβ-42로 인한 신경퇴행 및 아밀로이드 플라크 형성에 대한 유용한 모델이 될 수 있습니다.

3. 인지 저하: 5xFAD 모델은 인지 저하로 잘 알려져 있어 AD1와 관련된 인지 장애를 연구하는 데 유용한 모델입니다.

4. 연령 관련 변화: 연구에 따르면 5xFAD 마우스에서 연령 관련 운동 기능 저하가 나타났습니다.

5. 표현형 분석: 수많은 연구에도 불구하고 5xFAD 마우스는 전반에 걸쳐 혈관 및 대사 교란에 대해 포괄적으로 표현형이 분석되지 않았습니다.

이 모델은 AD의 병태생리학을 연구하고 잠재적인 치료 개입을 테스트하기 위한 강력한 플랫폼을 제공합니다.

 

만약 이 모델에서 PCR을 한다면, 아래와 같이 생각해 볼 수 있습니다.

 

프로토콜 22421와 프로토콜 31378의 프라이머를 마스터 믹스(Immomix 포함)로 사용할 경우.


 5xFAD(034840-JAX) 모델을 사용할 계획이며, 마스터 믹스(Immomix 포함)를 만들어 프로토콜 22421 및 프로토콜 31378의 프라이머를 사용할 계획입니다.

 

다음은 중합효소 연쇄 반응(PCR) 실험을 진행하는 방법에 대한 단계별 방법입니다.

1. 마스터 믹스 준비: 각 구성 요소의 적절한 양을 추가하여 마스터 믹스를 준비합니다. 여기에는 일반적으로 버퍼, dNTP, MgCl2 및 Immomix1가 포함됩니다. 정확한 부피는 특정 반응 조건과 PCR 반응의 총 부피에 따라 달라집니다.

2. 템플릿 및 프라이머 추가: DNA 템플릿과 프로토콜 22421 및 프로토콜 31378의 프라이머를 마스터 믹스에 추가합니다. 최종 반응에서 프라이머의 농도는 대개 0.1~0.5 µM입니다.

3. 초기 변성: 반응 혼합물을 약 10분 동안 95°C로 가열합니다. 이 단계는 Immomix의 Taq 중합효소를 활성화하고 DNA 주형을 변성시켜 두 가닥을 분리합니다.

4. PCR 사이클: 열 순환기에서 PCR 사이클을 진행합니다. 각 주기는 일반적으로 세 단계로 구성됩니다.
     - 변성 denaturation: 94~96°C에서 15~30초 동안 가열하여 DNA의 두 가닥을 분리합니다.
     - 어닐링 annealing:프라이머가 DNA 주형에 결합될 수 있도록 프라이머에 적합한 온도(보통 약 45~68°C)로 15~60초 동안 식힙니다.
     - 확장 extension:Taq 폴리머라제가 새로운 DNA 가닥을 합성할 수 있도록 예상 생성물의 킬로베이스당 약 1분 동안 72°C로 가열합니다.

5. 최종 확장: 마지막 사이클 후, 72°C에서 약 5분간 최종 확장을 수행하여 남아 있는 단일 가닥 DNA가 완전히 복제되는지 확인합니다.

6. 유지:마지막으로 단기 보관을 위해 반응물을 4~10°C로 식히거나 PCR 산물의 분석을 직접 진행합니다.

물론 위 설명은 일반적인 지침이며 예비 결과에 따라 최적화해야 할 수도 있습니다. 

 

시약 및 프로토콜과 함께 제공된 특정 지침을 따르면 좋을 것입니다.

 

이번 글에서는  5xFAD 마우스 모델과 PCR에 대해 간략히 살펴보았습니다.

 

감사합니다.

 

 

 

 

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